潔凈室生物學評價方法-回、排風高效過濾風口微生物透過率

回、排風高效過濾風口微生物透過率

1.1儀器設備和材料應符合以下要求 ：

1儀器設備 ：

Φ90玻璃平皿 （或塑料平皿） ；

空氣微生物采樣器 （ 固體撞擊式采樣器、離心式采樣器 、液 體沖擊式采樣器等均可使用，常用的為安德遜（ Andersen） 采 樣器 ，隸屬于固體撞擊式采樣器） ；

微生物氣溶膠發(fā)生器 （ 由氣泵、油水分離器 、流量計、高效 過濾器、噴霧器、緩沖瓶等組成） ；

各種玻璃移液管、吸管、試管、容器瓶等 ；

計時器 （如秒表） ；

恒溫培養(yǎng)箱 ； 潔凈工作臺； 高壓蒸汽消毒鍋 。

2材料：

膜蛋白酶大豆瓊脂培養(yǎng)基 ；

生理鹽水；

75 %酒精；

菌種 （宜選用毒性小或沒有毒性 ，且便于區(qū)別大氣雜菌的特 定菌種，常用的有枯草芽孢桿菌、黏質沙雷氏菌、大腸噬菌體 等） ；

采樣介質可選用硅酮類 、石油胨類、醇類 、糖類 、纖維素類 、蛋白類 、混合類 、組織培養(yǎng)液等 ；

套筒 （測定回、排風高效過濾風 口時需要使用，罩住整個入口，使檢漏范圍包括邊框 ，長度應使通過氣流時間為 0. 5s~1s，見圖F1. 1） 。

1.2透過率應按以下方法評價：

在回、排風高效過濾 風口進風端加設套筒，在 套筒 口部發(fā)生微生物氣溶膠，在過濾器出風面用浮 游菌法采樣 ，由回、排風高效過濾風口前后的微生物氣溶膠濃度可計算得出微生物透過率。

1.3 檢測步驟應符合下列要求：

1 制定方案 ：明確評價任務 ，制定詳細的評價方案 ，包括 確定微生物氣溶膠、發(fā)生器所需的菌液濃度 、潔凈壓縮空氣流 量 ，確定在回、排風高效過濾風口出風端的微生物采樣周期、采 樣次數等 ，一般可根據回、排風高效過濾風口的塵埃顆粒物過濾 效率進行計算。

2 實驗準備 ：根據預先制定的評價方案 ，準備所需材料、儀器設備 ，制作采樣培養(yǎng)血，一般而言，采樣細菌用營養(yǎng)瓊脂培 養(yǎng)基 ，采集真菌用沙氏或真菌選擇培養(yǎng)基，采樣病毒用根據病毒 特性配制的采樣介質。

3 發(fā)生微生物氣溶膠 ：將培育好的高濃度微生物溶液，一般為（10⁸~10¹⁰) cfu/mL，利用生理鹽水按10倍稀釋法逐次稀釋至需要的低濃度（步驟 1確定的濃度） ，然后由移液管、吸管量取一定容積的低濃度微生物溶液至氣溶膠發(fā)生裝置的溶液 瓶 ，由微生物氣溶膠發(fā)生器在回、排風高效過濾風口的進風端將 微生物溶液霧化發(fā)生微生物氣溶膠。

4 采樣 ：對于回、排風高效過濾風口 ，可在其后的出風管 道中采樣 ，離排風高效過濾風口的距離根據實際工程而定，原則 上出風后有所混合 ，能近則好 ，采樣點沿風管寬度方向均勻布置 3 點。采樣周期、采樣次數按預先制定的評價方案執(zhí)行。采樣過程中，不能中斷微生物氣溶膠的發(fā)生 ，采樣結束后才能停止發(fā)生微生物氣溶膠 ，此后噴霧器中必須尚存不少于一半的微生物溶液，且需對剩余菌液活性進行涂布法驗證，以修正菌液濃度 。

5 培養(yǎng) ：將采好的平皿立即蓋上蓋 ，細菌類在 （ 35~37） ℃ 培養(yǎng)1~2) d ，結核菌培養(yǎng) 3 周，真菌在 28℃培養(yǎng).3d 。上述培 養(yǎng)時間可根據所采樣微生物特性而適當調整 ，培養(yǎng)的過程 中應定 期觀察培養(yǎng)箱內菌落的生長情況 ，避免培養(yǎng)箱內干燥菌落不生長 或培養(yǎng)皿內菌落過多充分生長匯合等情況的發(fā)生。

6 計數：可以目測 、電子顯微鏡、菌落計數器等對采集到 且培養(yǎng)好的菌落進行計數 ，當采到的菌落很多時，在它們未生長 匯合前，用顯微鏡及早觀察 ，將平皿劃成許多相等的部分抽出一 部分數菌，然后乘以所劃份數，即可得出每皿總菌數。計數完畢 后 ，可根據式 （F.1.3-1）計算濃度 ：

（F.1.3-1）

式中：C 一一微生物氣溶膠濃度 （cfu/ L) ；

N 一一采樣到的微生物所形成的菌落數（cfu) ；

V 一一微生物采樣器的采樣流量 （ l.1/min) ；

ts 一一一采樣周期 （min） 。

7微生物透過率計算 ：根據回、排風高效過濾風口前后的微生物氣溶膠濃度由式 （F1. 3-2） 可計算得出微生物透過率 K：

(F. 1. 3-2)

式中：Cd 一一回、排 風高效過濾風 門后的微 生物氣溶膠濃度(cfu/L），可由式（F. 1. 3-1）計算得出；

Cu 一一回、排 風高效過濾風 口前的 微生物氣溶膠濃度(cfu/L），可根據微生物溶液濃度C1 ( cfu/ mL） 、 菌液消耗容積 V (mL） 、氣溶膠發(fā)生時間 t ( min） 、 風口風量 G（L/min） 由式 （ F. 1. 3-3） 計算得出：

（F. 1. 3- 3)

8消毒滅菌 ：實驗結束后 ，需對剩余菌液 以及所用各種儀器 、 設備、平皿等進行消毒滅菌、酒精擦洗處理。

1.4在進行潔凈室生物學評價時應符合以下要求 ：

1正式試驗前，應進行預備試驗 ，并對各種儀器進行調試 和標定。

2應進行陽性對照試驗 。

3應進行陰性對照試驗。

4應在陽性試驗中長菌，陰性試驗組不長菌。

5實驗過程中應注意實驗人員的安全防護，實驗結束后應 做好各種儀器、設備、衣物等的消毒滅菌處理。

6試驗結束后，需對微生物氣溶膠發(fā)生器內的剩余菌液活性進行涂布法驗證，修正式（F. 1. 3-3） 中的菌液濃度。

7采樣周期應設計合理 ，當確定采樣周期存在一定困難時， 宜增加采樣次數，每次采樣使用不同的采樣周期。

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